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產(chǎn)品中心
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免疫組化試劑 Immunohistochemistry

通用免疫組化試劑盒
通用免疫組化試劑盒

通用免疫組化試劑盒

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產(chǎn)品介紹

免疫組化試劑盒使用說明書

保存方法：2-8℃保存。     有效期：一年。     生產(chǎn)日期：見封口。

適用種屬：人，大鼠，小鼠，兔子，羊，雞，牛等等

工作原理：

辣根過氧化物酶（HRP）的分子量（40000），它不會遮蓋抗原的結(jié)合部位，具有較高活性及特異性，可溶性佳，生成的產(chǎn)物不擴(kuò)散，可作用于多種底物，產(chǎn)生不同顏色且HRP穿透力強(qiáng)，易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。DAB在 H2O2存在的情況下，可以作為HRP的電子供體，產(chǎn)生褐色的不溶顆粒，可作為顯色的試劑。

試劑盒內(nèi)容：


名稱

規(guī)格

1

0.01mol/L pH6.0枸櫞酸鹽緩沖液

0.5L

2

PBS緩沖液

1L

3

廣譜二抗

1.5mL

4

30%H2O 2

5mL

5

DAB顯色液I

0.3mL

6

DAB顯色液II

0.3mL

自備試劑：無水乙醇、蘇木素。

操作步驟：

1. 60℃常規(guī)脫蠟至水后，將石蠟切片先后浸入二甲苯Ⅰ，二甲苯Ⅱ各10min。然后逐級降濃度酒精入水，每次3-5 min。

①

無水酒精

3－5min

②

90% 酒精

3－5min

③

85% 酒精

3－5min

④

75% 酒精

3－5min

⑤

PBS洗滌3次

每次5 min

2.熱修復(fù)抗原： 將切片置于0.01mol/L pH6.0枸櫞鈉緩沖液，微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔5-10 min后，反復(fù)1-2 次，置于室溫自然冷卻。0.01 mol/L  pH7.0左右的PBS洗滌3次，每次5 min 

3.消除內(nèi)源性過氧化物酶：用3% H 2 O 2 室溫孵育 5-10 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次，每次5 min；

4.滴加一抗： 滴加適當(dāng)稀釋的一抗到切片上，37℃孵育一定時(shí)間或者4℃過夜， pH7.4的PBS洗滌3次，每次5 min 。（一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來說，陽性染色強(qiáng)度不夠時(shí)，可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時(shí)間；背景過高時(shí)，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。）

5.加入廣譜二抗，37℃孵育一段時(shí)間，取出后PBS洗滌3次，每次5 min。

6.DAB顯色： 取DAB顯色液I及II各50微升加至入1mL的水中，配成DAB工作液，滴加到切片上，室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。蒸餾水充分洗滌以終止反應(yīng)。

7..觀察顯色后自來水沖，蘇木精復(fù)染1-2min，，自來水沖10min，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，干燥，分析拍照。


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