細胞無機磷/游離磷酸根離子比色法定量檢測試劑盒產品說明書
主要用途
細胞無機磷/游離磷酸根離子比色法定量檢測試劑是一種旨在使用硫酸亞鐵氨，在酸性環(huán)境下，與游離磷酸根反應，還原產生顯色產物鉬藍，呈現吸光峰值的變化，即采用比色法測定離子濃度的經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種細胞裂解懸液樣品的無機磷/游離磷酸根離子的檢測。可應用于細胞酶學、結合蛋白成分等研究。產品不含污染性蛋白酶，嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，反應優(yōu)化，檢測敏感。
技術背景
無機磷/游離磷酸根離子（Phosphate；PO4-3）作為游離離子存在于水資源系統(tǒng)；作為鹽類分子存在于陸地環(huán)境中、巖礦床上等。由于磷酸根離子沒有和生物分子整合，故成為無機磷（inorganic phosphate）。無機磷是陸地和水生植物生長的三大主要營養(yǎng)元素之一，常用于肥料促進農作物生長和發(fā)育，也是藻類爆發(fā)的原因之一。同時可以用于水質軟化劑（water softener）。無機磷/游離磷酸根離子水平檢測成為水質和環(huán)境健康監(jiān)測的重要指標。在生物體系中，磷作為骨和牙組織的結構元素，也是生物能量分子例如ATP、ADP、AMP等，以及體內磷酸化酶底物的基本元素。通過檢測游離磷酸根水平，反映生物體的磷酸化狀況等。基于游離磷酸根離子，在酸性環(huán)境下，與硫酸亞鐵氨反應，還原產生鉬藍顯色產物，呈現吸光峰值的變化，來定量測定無機磷/游離磷酸根離子濃度。
產品內容
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
緩沖液（Reagent C） 毫升
顯色液（Reagent D） 毫升
標準液（Reagent E） 微升
產品說明書 1份
保存方式
保存裂解液（Reagent B）和顯色液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；顯色液（Reagent D）具有腐蝕性，避免直接用手接觸；有效保證6月
用戶自備
15毫升離心管：用于樣品處理的容器
1.5毫升離心管：用于樣品處理和保存的容器
細胞刮脫棒：用于貼壁細胞脫離
（微型）臺式離心機：用于樣品收集
培養(yǎng)箱：用于孵育反應物
比色皿或酶標板：用于比色的容器
分光光度儀或酶標儀：用于比色分析
實驗步驟
實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液放進冰槽里融化。然后進行下列操作。
樣品準備及測定步驟見詳細說明書
計算樣品活性
七、酶標儀測定
1． 在96孔板上做好相應標記：標準樣品、待測樣品
2． 分別移取100微升上述配制的標準液到相應的標準樣品孔里
3． 移取xx微升緩沖液（Reagent C）到待測樣品孔里
4． 加入10微升待測樣品（總量100微克細胞裂解萃取液蛋白）到待測樣品孔里
5． 分別加入xx微升顯色液（Reagent D）到所有孔里
6． 輕輕搖動酶標板
7． 在37℃溫度下孵育10分鐘，避免光照
8． 即刻放進酶標儀檢測：獲得吸光讀數
9． 構建標準曲線：縱座標（Y軸）為吸光單位（A）；橫座標（X軸）為標準磷濃度（微摩爾/升）
10． 根據標準曲線獲得樣品對應磷濃度
11． 計算樣品活性
注意事項
1． 本產品為20次（比色皿）和40次（酶標板）操作
2． 本產品檢測范圍為20微摩爾以上
3． 操作時，須戴手套
4． 顯色液（Reagent D）具有腐蝕性，避免直接用手接觸
5． 樣品切忌使用磷酸緩沖液和脫氧膽酸納處理
6． 比色測定后，比色皿須清洗徹底
7． 如果用戶沒有660nm波長，可以使用600至660nm的任一波長替代
8． 吸光讀數增高，表明具有無機磷/游離磷酸根離子
9． 建議待測樣本蛋白濃度為100微克/20微升；如果樣本無機磷/游離磷酸根離子濃度過低或過高，則可以增加或降低樣本量
10． 本公司提供系列離子檢測試劑產品
質量標準
1． 本產品經鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產品經鑒定檢測準確
使用承諾
秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)良產品和服務。用戶收到貨后，應按照產品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內若發(fā)現確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯系，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。
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