植物原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins, OPC）試劑盒說(shuō)明書(shū)

For Research Use only

僅供研究用

貨號(hào)：QYS-23064

微量法  100管/48樣

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

植物原花青素(OPC)含量測(cè)定意義:

原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一類(lèi)黃烷醇單體及其聚合體的多酚化合物，廣泛存在于植物的各種器官中，具有極

強(qiáng)的抗氧化性和清除自由基的作用，廣泛的應(yīng)用于醫(yī)藥，食品，化妝品，保健品行業(yè)。

植物原花青素(OPC)含量測(cè)定原理:

在酸性條件下，植物原花青素 A 環(huán)上的間苯二酚和間苯三酚與香草醛發(fā)生縮合反應(yīng)，產(chǎn)生有色化合物，在 500nm 處有特征吸收峰，測(cè)定

 500nm 光吸收值，可計(jì)算植物中原花青素的含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、常溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水、鹽酸、無(wú)水乙醇和甲醇。

植物原花青素(OPC)試劑組成和配制:

提取液：60%乙醇，自備，4℃保存。（60mL 無(wú)水乙醇溶于 40mL 蒸餾水） 

試劑一：8%鹽酸 10mL，自備，4℃保存。（800μL 鹽酸溶于 9.2mL 甲醇） 

試劑二：粉劑 0.1g×1 瓶，4℃避光保存，臨用前加 10 甲醇水溶解。

工作液：臨用前按照用量將試劑一和試劑二按照 1:1 混合。

植物原花青素(OPC)提取:

稱(chēng)取約 0.1g 樣本，加入 2mL 提取液，用超聲提取法進(jìn)行提取，超聲功率 300W，破碎 5s， 間歇 8s，提取，30min， 10000g，25℃，

離心 10min，取上清，用提取液定容至 2mL，待測(cè)。

測(cè)定操作表:

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 500nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 操作表

對(duì)照管測(cè)定管

樣本（μL）4040

工作液（μL）160

H2O（μL）160

混勻，30℃水浴 30min，于微量石英比色皿/96 孔板中檢測(cè) 500nm 處吸光值，ΔA=A 測(cè)定-A對(duì)照。

植物原花青素(OPC)含量計(jì)算公式:

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y=0.0194x+0.0006，R²=0.999

OPC 含量（mg/g 鮮重）= (ΔA-0.0006）÷0.0194×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×10^-3= 0.515×(ΔA-0.0006）÷W

V 樣總：加入提取液體積，2mL； V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL；W：樣品質(zhì)量，g

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y=0.0097x+0.0006，R2=0.999

OPC 含量（mg/g 鮮重）= (ΔA-0.0006）÷0.0097×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×10^-3= 1.03×(ΔA-0.0006）÷W

V 樣總：加入提取液體積，2mL； V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL；W：樣品質(zhì)量，g

試劑盒注意事項(xiàng)：

1、配制好的試劑二應(yīng)盡快使用，4℃保存時(shí)間不超過(guò)一個(gè)月。

2、吸光度變化應(yīng)該控制在 0.01～0.8 之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計(jì)算公式中參與計(jì)算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。

注：電子版說(shuō)明書(shū)僅供參考、具體請(qǐng)參考試劑盒紙質(zhì)版說(shuō)明書(shū)。

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