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脂肪酶（Lipase，LPS）活性試劑盒說明書

For Research Use only

僅供研究用

貨號：QYS-233092

分光光度法 50管/48樣

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

脂肪酶(LPS)測定意義：

Lipase又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中 LPS 的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。

脂肪酶(LPS)測定原理：

LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測定脂肪酸生成速率，即可計算 LPS 活性。

自備儀器和用品：

研缽、臺式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、甲苯 100mL、冰和蒸餾水。

脂肪酶(LPS)檢測試劑組成和配制：

試劑一：液體 90mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 14mL×1 瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩 20min。

試劑三：甲苯 100mL×1 瓶，4℃保存（自備）。

試劑四：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 10μL×1 瓶，10 μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。臨用前加入 3.168 mL 甲苯，充分溶解。

粗酶液提?。?/font>

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 12000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體: 直接檢測。

脂肪酶(LPS)測定操作：

1. 分光光度計預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到 710 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一和試劑二置于 37℃水浴預(yù)熱 30min 以上。

3. 在 5mL EP 管中依次加入下列試劑

37℃振蕩反應(yīng) 5 min 后，靜置 5min，取 800μL 上層液加入 1 mL 玻璃比色皿，于 710nm 處測定吸光值。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

脂肪酶(LPS)活性計算公式：

1. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞 LPS 活性

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol/min/mg prot) = [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]×V 反總÷（Cpr×V 樣）÷T =16×[(A 測定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T =16×[(A 測定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]÷W

（3）按照細(xì)菌或者細(xì)胞數(shù)量計算

活性單位定義：37℃中每 10⁴ 個細(xì)胞每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol /min/10⁴cell) = [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]×V 反總÷（細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總）÷T =16×[(A 測定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]÷細(xì)胞數(shù)量

2. 血清等液體 LPS 活性

活性單位定義：37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol /min/mL) = [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]×V 反總÷V樣÷T=16×[(A 測定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）] 

C 標(biāo)準(zhǔn)品：10 μmol/mL；V 反總：反應(yīng)總體積，2mL；V 樣：反應(yīng)中加入樣本體積，0.125mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒（貨號：QYS-237014）；W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時間，10 min。