單寧含量試劑盒說明書

For Research Use only

僅供研究用

貨號：QYS-23082

微量法 100管/96樣

正式測定前取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

單寧含量測定意義：

單寧是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的多元酚化合物，又稱植物多酚。具有獨特的化學性質(zhì)和多種生理活性，如能與蛋白質(zhì)、生物堿、多糖結(jié)合；能與多

種金屬離子發(fā)生絡(luò)合或靜電作用； 具有止血、抑制微生物、抗突變、抗腫瘤、抗衰老等生理活性。 

單寧含量測定原理： 

單寧在堿性環(huán)境下與磷鉬酸反應(yīng)，生成藍色化合物，在 760nm 處有最大吸收峰。 

單寧含量試劑盒需自備的儀器和用品： 

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 4mL× 1 瓶，4℃保存； 

試劑二：液體 3mL × 1 瓶，4℃保存； 

單寧的提取：

按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL蒸餾水），充分勻漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中，80℃水浴提取

 30min， 8000  g，25℃離心 10  min，取上清液待測。

單寧含量測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 760nm 處，蒸餾水調(diào)零；試劑一和試劑二 37℃預(yù)熱 10min 以上；

2、操作表：

試劑名稱（μL）對照管測定管

見詳細說明書

混勻，室溫靜置 30min，760nm 處讀取吸光值 A，ΔA=A 測定-A 對照，對照管只要做一管。

單寧含量計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下：

1、標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0132x - 0.0035；x 為標準品濃度(μg/mL)，y 為吸光值。

2、按樣本鮮重計算：

單寧含量（μg /g 鮮重）= [(ΔA＋0.0035) ÷0.0132×V1]÷（W×V1÷V2）=75.76×(ΔA＋0.0035)÷W。

3、按樣本蛋白濃度計算：

單寧含量(μg/mg prot)= [(ΔA＋0.0035) ÷0.0132×V1]÷(V1×Cpr)=75.76×(ΔA＋0.0035) ÷Cpr。

此法蛋白質(zhì)含量需另外測定，我司提供三種方法蛋白質(zhì)濃度試劑盒(QYS-237009)雙縮脲法、(QYS-237011)考馬斯亮藍法、(QYS-237013)BCA法。

V1：加入樣本體積，0.005mL；V2：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下：

1、標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0066x - 0.0035；x 為標準品濃度（μg/mL），y 為吸光值。

2、按樣本鮮重計算：

單寧含量(μg/g 鮮重)=[(ΔA＋ 0.0035)÷0.0066 × V1]÷(W × V1÷V2)=151.52 ×(ΔA＋ 0.0035)÷W。

3、按樣本蛋白濃度計算：

單寧含量(μg/mg prot)= [(ΔA＋0.0035)÷0.0066×V1]÷(V1×Cpr)=151.52×(ΔA＋0.0035)÷Cpr。

V1：加入樣本體積，0.005mL；V2：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

注：電子版說明書僅供參考、具體請參考試劑盒紙質(zhì)版說明書。

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