非蛋白巰基測(cè)定試劑盒說明書

For Research Use only

僅供研究用

貨號(hào)：QYS-23086

微量法 100管/48樣

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

非蛋白巰基測(cè)定意義：

生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基。巰基化合物在體內(nèi)具有重要的解毒功能，對(duì)生物體的自我調(diào)節(jié)具有非常重要的生理意義。

非蛋白巰基測(cè)定原理：

巰基基團(tuán)與 5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在 412nm 處有最大吸收峰。

非蛋白巰基試劑盒自備實(shí)驗(yàn)用品：

天平、研缽、恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板和甲醇。

非蛋白巰基試劑組成和配制：

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 1 mL×1 管，4℃避光保存。

非蛋白巰基樣品的制備：

1.動(dòng)物、植物組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后加入

 4mL 甲醇，室溫震蕩 10min， 然后 10000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。

2.細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1  的比例（建議 500萬細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 

300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）然后 10000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。

3.血清、培養(yǎng)液：取 0.1mL，加 0.4mL 甲醇，室溫震蕩 10min，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測(cè)。

非蛋白巰基測(cè)定操作步驟：

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 412nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表

詳見說明書

混勻，25℃靜置，于微量石英比色皿/96 孔板，測(cè)定 412nm 吸光值。ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照。

非蛋白巰基計(jì)算公式：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.7236 x，R² = 0.9994

1.組織：

詳見說明書

2.血清、培養(yǎng)液：

詳見說明書

3.細(xì)胞：

詳見說明書

V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.8618x，R² = 0.9994

1.組織：

詳見說明書

2.血清、培養(yǎng)液：

詳見說明書

3.細(xì)胞：

詳見說明書

V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；

注：電子版說明書僅供參考、具體請(qǐng)參考試劑盒紙質(zhì)版說明書。

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