花色苷含量試劑盒說明書
For Research Use only
僅供研究用
貨號(hào)：QYS-23036
微量法 100管/96樣
正式測(cè)定前取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
花色苷含量測(cè)定意義：
花色苷是一類易溶于極性溶劑的天然色素，屬黃酮類化合物?；ㄉ諒V泛存在于植物的根、莖、葉、花和果實(shí)中，使其呈現(xiàn)由紅到紫等不同顏色，是植物主要的呈色物質(zhì)。
花色苷含量測(cè)定原理：
采用 pH 示差法測(cè)定花色苷含量，當(dāng) pH 為 1.0 時(shí)花色苷在 530nm 處有最大吸收峰,而當(dāng) pH 為 4.5 時(shí),花色苷轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色查爾酮形式,在 530 處無吸收峰, 利用此特性分別測(cè)定在不同 pH 下的 530nm 和 700nm 處的吸光度值。pH 示差法減少了溶液 pH 和溶劑差異的影響，排除了其他非花色苷類物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。
花色苷含量試劑盒需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體 100 mL× 1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 20 mL× 1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 20 mL × 1 瓶，4℃保存；
花色苷的提?。?/span>
按照烘干樣品質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 烘干樣品，加入 1mL 提取液），充分勻漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中，提取液定容至 1 mL，蓋緊后 4℃浸提 24 h，8000 g，常溫離心 10 min， 取上清液待測(cè)。
花色苷含量測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上；試劑一和試劑二 25℃（室溫）預(yù)熱 10min 以上；
2、取 20 μL 上清液和 180 μL 試劑一（相當(dāng)于稀釋 10 倍），靜置 15min，分別測(cè)定 530nm 和 700nm 處的吸光值，分別記為 A1 和 A2。
3、 取 20 μL 上清液和 180 μL 試劑二（相當(dāng)于稀釋 10 倍），靜置 15min，分別測(cè)定 530nm 和 700nm 處的吸光值，分別記為 A3 和 A4。
4、 計(jì)算△A=(A1-A2)-(A3-A4)
注意：如果A1大于1，可以適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)，保證總體積200 μL不變，如10 μL上清液和190 μL試劑一（相當(dāng)于稀釋20倍）；如果A1小于0.1，可以適當(dāng)縮小稀釋倍數(shù)，保證總體積不變，如100 μL上清液和100μL試劑一（相當(dāng)于稀釋2倍），使A1保持在0.1~1范圍內(nèi)，可提高檢測(cè)靈敏度；同樣調(diào)整上清液和試劑二體積比例；計(jì)算時(shí)以實(shí)際稀釋倍數(shù)代入下述公式中。
花色苷含量計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
花色苷含量（μg/g 干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×106]÷W=16.7×ΔA× F÷W
V：提取液體積，1×10-3L；ε：花色苷的摩爾消光系數(shù)，2.69×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；M： 花色苷的相對(duì)分子質(zhì)量：449.2g/mol；F：稀釋倍數(shù)；106：1g=106μg；W：樣本干重：g。
b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
花色苷含量（μg/g 干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×106]÷W=33.4×ΔA× F÷W
V：提取液體積，1×10-3L；ε：花色苷的摩爾消光系數(shù)，2.69×104 L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；M：花色苷的相對(duì)分子質(zhì)量：449.2g/mol；F：稀釋倍數(shù)；106：1g=106μg；W：樣本干重：g。
注：電子版說明書僅供參考、具體請(qǐng)參考試劑盒紙質(zhì)版說明書。
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