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二胺氧化酶（Diamine Oxidase，DAO）試劑盒說明書

For Research Use only

僅供研究用

貨號：QYS-23051

分光光度法 50管/24樣

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

二胺氧化酶（DAO）測定意義

DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動物（腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等）、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛，其活性與核酸和蛋白合成密切相

關(guān)，能夠反映腸道機(jī)械屏障的完整性和受損傷程度。

二胺氧化酶（DAO）測定原理

DAO 催化尸胺產(chǎn)生醛和過氧化氫，外源添加過量的辣根過氧化物酶，催化過氧化氫氧化鄰聯(lián)茴香胺生成氧化型鄰聯(lián)茴香胺，在 460nm 處

有特征吸收峰，通過測定該波長吸光度增加速率，計算DAO 活性。

自備實驗用品及儀器

天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計、1 mL 玻璃比色皿、蒸餾水。

二胺氧化酶（DAO）試劑組成和配制

提取液：液體 80mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 0.5mL×1 支，4℃保存。

試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

二胺氧化酶（DAO）粗酶液提取

1.組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 20min，取上清，置冰上待測。

2.細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1  的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲

波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

3.血清等液體：直接測定。

測定操作表

詳見說明書

二胺氧化酶（DAO）酶活計算公式

（1）按樣本蛋白濃度計算：

詳見說明書

（2）按樣本質(zhì)量計算：

詳見說明書

（3）按細(xì)胞數(shù)量計算：

詳見說明書

(4) 按液體體積計算

詳見說明書

ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺毫摩爾消光系數(shù)：7.5 L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)總體積，1mL；V 樣：反應(yīng)中樣本體積，

0.25mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr： 樣本蛋白濃度，mg/mL；T：反應(yīng)時間，30min

注意事項

1、如果 OD 值小于 0.01，適當(dāng)加大提取用的樣本質(zhì)量； OD 值大于 0.8，粗酶液可適當(dāng)稀釋，或者減少提取用樣本量。

2、樣品蛋白質(zhì)含量需另外測定，我司提供三種方法蛋白質(zhì)濃度試劑盒(QYS-237009)雙縮脲法、(QYS-237011)考馬斯亮藍(lán)法、(QYS-237013)

BCA法。

注：電子版說明書僅供參考、具體請參考試劑盒紙質(zhì)版說明書。

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