吲哚乙酸氧化酶活性測定試劑盒說明書

For Research Use only

僅供研究用

貨號：QYS-23002

分光光度法 50管/48樣

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

吲哚乙酸氧化酶測定意義：

吲哚乙酸（IAA）在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破壞失去活性。植物體內(nèi)吲哚乙酸氧化酶活力的大小，對調(diào)節(jié)體內(nèi)吲哚乙酸

的水平，起著重要的作用，而影響植物的生長。

吲哚乙酸氧化酶測定原理：

在無機酸存在情況下，吲哚乙酸能與 FeCl3 作用，生成紅色螯合物，該物質(zhì)在 530nm 處有最大吸收峰，酶活力的大小可以其破壞

吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法   測定。

試劑盒自備儀器和用品：

低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、1.5mL 離心管、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體 120mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑五：液體 2mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑六：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。臨用前吸取 1mL 試劑五加入試劑六中混勻，待用，避光保存

吲哚乙酸氧化酶粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）進行冰浴勻漿。

8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上待測。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 試劑一），

冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7秒，總時間 3min）；然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體：直接測定。

吲哚乙酸氧化酶酶活測定操作：

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長到 530 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二、試劑三、試劑四置于 25℃（一般物種）或者 37℃（哺乳動物）水浴中保溫 20min。

3. 取 1.5mL EP 管若干，操作表見說明書：注意：標(biāo)準(zhǔn)管只需做一次

吲哚乙酸IAA 氧化酶活性計算公式：

a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

IAA 標(biāo)準(zhǔn)曲線公式：y = 1.334x + 0.025 R2 = 0.998 （x 為 IAA 濃度，mmol /L；y 為吸光值）

（1） 按蛋白濃度計算

酶活定義：從開始時加入的 IAA 量減去酶作用后殘留的 IAA 含量，即得被酶所催化的 IAA含量。以每 mg 酶蛋白在 1h 內(nèi)分

解破壞的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

U（μmol/h/mg prot）=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V 樣÷（V 樣×Cpr）÷T=1.5×（A1-A2）÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算

酶活定義：以每 g 樣本在 1h 內(nèi)分解破壞的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

U（μmol/h/g 鮮重）=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T=1.5×（A1-A2）÷W

（3） 按細(xì)胞數(shù)量計算

酶活定義：以每 1 萬個細(xì)胞在 1h 內(nèi)分解破壞的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

U（μmol/h/104 cell）=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T=1.5×（A1-A2）÷細(xì)胞數(shù)量

（4） 按液體體積計算

酶活定義：以每 mL 酶液在 1h 內(nèi)分解破壞的吲哚乙酸量表示酶活力大小。

U（μmol/h/mL）=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V 樣÷(V 樣÷V 樣總) ÷T=1.5×（A1-A2）

V 樣總：上清液總體積，1mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；Cpr： 上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，

蛋白質(zhì)含量需另外測定，我司提供三種方法蛋白質(zhì)濃度試劑盒(QYS-237009)雙縮脲法、(QYS-237011)考馬斯亮藍法、(QYS-237013)

BCA法。；W：樣品質(zhì)量，g，T：反應(yīng)時間，0.5h。

注意事項：

1. 最低檢出限為 0.01μmol/mL。

注：電子試劑盒說明書僅供參考、具體請參考試劑盒紙質(zhì)版說明書。

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