超氧陰離子(Oxygen free radical, OFR)試劑盒說(shuō)明書(shū)

For Research Use only

僅供研究用

貨號(hào)：QYS-23053

分光光度法 50管/48樣

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

超氧陰離子(OFR)測(cè)定意義

生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號(hào)傳導(dǎo)的作用，但積累過(guò)多時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織

代謝異常，從而引起多種疾病。

超氧陰離子(OFR)測(cè)定原理

超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成 NO －，NO －在對(duì)氨基苯磺酸和 α－萘胺的作用下，生成紅色的偶氮化合物，在 530nm 處有特征吸收峰，

根據(jù) A530 值可以計(jì)算樣品中 O －含量，反應(yīng)式 為 NH2OH + 2O － ＋H＋ → NO － ＋ H O ＋ H O 。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL 玻璃比色皿、氯仿和蒸餾水。

超氧陰離子(OFR)試劑組成和配制

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑四：氯仿，自備。

超氧陰離子提取

1.植物、動(dòng)物組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃，離心 20min，取上清置于冰上待測(cè)。。

2.細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1  的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7秒，總時(shí)間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 20min，取上清置于冰上待測(cè)。

3.血清或培養(yǎng)液：直接測(cè)定。

超氧陰離子(OFR)測(cè)定操作表

詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū)

超氧陰離子含量計(jì)算公式

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y=0.0115x-0.0038，R2=0.9986

超氧陰離子含量計(jì)算公式：

1.組織：

（1）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

超氧陰離子含量（μmol/g 鮮重）= (A530+0.0038)÷0.0115× V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×10-3×2= 1.74×(A530+0.0038)÷W

超氧陰離子產(chǎn)生速率（μmol/ g·min）= 1.74×(A530+0.0038)÷W÷T= 0.087×(A530+0.0038)÷W

（2）按照蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

超氧陰離子含量（μmol/mg prot）= (A530+0.0038)÷0.0115× V 反總÷(V 樣×Cpr)×10-3×2= 1.74×(A530+0.0038)÷Cpr

超氧陰離子產(chǎn)生速率（μmol/mg prot·min）= 1.74×(A530+0.0038)÷Cpr÷T= 0.087×(A530+0.0038)÷Cpr

2.細(xì)菌，真菌：

超氧陰離子含量（μmol/10⁴ cell）=(A530+0.0038)÷0.0115× V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)×10-3×2

= 1.74×(A530+0.0038)÷細(xì)胞數(shù)量

超氧陰離子產(chǎn)生速率（μmol/10⁴ cell·min）= 1.74×(A530+0.0038)÷細(xì)胞數(shù)量÷T= 0.087×(A530+0.0038)÷細(xì)胞數(shù)量

3.血清或培養(yǎng)液

超氧陰離子 含量（μmol/L）= (A530+0.0038)÷0.0115× V 反總÷V 樣×2= 1739.13×(A530+0.0038)

超氧陰離子產(chǎn)生速率（μmol/ L·min）=1739.13×(A530+0.0038) ÷T= 86.96×(A530+0.0038)

V 樣總：加入提取液體積，1 mL； V 反總：反應(yīng)總體積，2mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：

樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min；2： 2分子 O2－參與反應(yīng)生成 1 分子 NO2－。 

注意事項(xiàng)

1、 吸光值大于 0.8，樣品適當(dāng)稀釋再測(cè)定，注意計(jì)算公式里乘以稀釋倍數(shù)。

2、 樣品制備好之后，立刻進(jìn)行測(cè)定，請(qǐng)勿將樣品進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的低溫保存，以免影響測(cè)定結(jié)果。

3、 試劑四有一定的毒性，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施。

4、 最低檢出限為 0.33μmol/L。

注：電子版說(shuō)明書(shū)僅供參考、具體請(qǐng)參考試劑盒紙質(zhì)版說(shuō)明書(shū)。

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