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苯丙氨酸解氨酶（Phenylalnine ammonialyase，PAL）試劑盒說明書

For Research Use only

僅供研究用

貨號(hào)：QYS-23044

分光光度法 50管/48樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

苯丙氨酸解氨酶（PAL）測(cè)定意義

PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數(shù)微生物中，是植物體內(nèi)苯丙烷類代謝的關(guān)鍵酶，與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關(guān)， 在植物正常生長(zhǎng)發(fā)育和抵御病菌侵害過程中起重要作用。

苯丙氨酸解氨酶（PAL）測(cè)定原理

PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm 處有最大吸收值， 通過測(cè)定吸光值升高速率計(jì)算 PAL 活性。

所需的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、離心機(jī)、可調(diào)移液器、1 mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

苯丙氨酸解氨酶（PAL）試劑的組成和配制

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×3 瓶，4℃保存。臨用前每瓶加入 4mL 蒸餾水水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；

試劑三：液體 2.5mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提取

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL

提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

苯丙氨酸解氨酶（PAL）測(cè)定步驟

見詳細(xì)說明書

PAL 活性計(jì)算

（1）按蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每 mg 組織蛋白在每 mL 反應(yīng)體系中每 min 使 290nm 下吸光值變化 0.1 為一個(gè)酶活性單位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V 反總÷（Cpr× V 樣）÷0.1÷T =17.3×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每 g 組織每mL 反應(yīng)體系中每min 使 290nm 下吸光值變化 0.1 為一個(gè)酶活性單位。

PAL（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.1÷T =17.3×ΔA÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.04mL； V 樣：加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；

注：電子版說明書僅供參考、具體請(qǐng)參考試劑盒紙質(zhì)版說明書。

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