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超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase, SOD）試劑盒說明書

For Research Use only

僅供研究用

貨號：QYS-23028

分光光度法：50 管/48樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測

超氧化物歧化酶SOD活性測定意義：

 超氧化物歧化酶SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成 H₂O₂ 和 O₂。 超氧化物歧化酶SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是 H₂O₂ 主要生成酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。

超氧化物歧化酶SOD活性測定原理：

通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O^2-.)，O^2-.可還原氮藍四唑生成藍色甲臜，后者在 560nm 處有吸收；SOD 可清除 O^2-.，從而抑制了甲臜的形成；反應液藍色越深，說明 SOD 活性愈低，反之活性越高。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制：

提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：15mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×5 瓶，4℃保存，用時每支加 5.4mL 蒸餾水，充分溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用；

試劑三：液體 350μL×1 支，4℃保存；

試劑四：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴ 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

超氧化物歧化酶SOD活性測定步驟：

1、 分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 560nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 將試劑三用蒸餾水稀釋兩倍，用多少配多少。 

3、 測定前將試劑一、二和四 37℃（哺乳動物）25℃（其他物種）水浴 5min 以上。

4、 樣本測定（在 EP 管中依次加入下列試劑）：

充分混勻，室溫靜置 30min 后，加入 1mL 玻璃比色皿，560nm 處測定各管吸光值 A。

注意事項：

1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于 2，建議將試劑三用蒸餾水稀釋 7 倍后使用（10μL 試劑三原液+60μL蒸餾水）。

超氧化物歧化酶SOD活性計算：

1、抑制百分率的計算抑制百分率＝(A 對照管－A 測定管) ÷A 對照管× 100%

盡量使樣本的抑制百分率在 30-70%范圍內(nèi)。如果計算出來的抑制百分率小于 30%或大于70%，則通常需要調(diào)整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需將樣本用提取液適當稀釋；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度比較高的待測樣本。

2、SOD 酶活性單位：在上述黃嘌呤氧化酶藕聯(lián)反應體系中抑制百分率為 50%時，反應體系中的 SOD 酶活力定義為一個酶活力單位(U/mL)。

3、SOD 酶活性計算：

（1）血清（漿）SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷V 樣×樣本稀釋倍數(shù)=11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)×樣本稀釋倍數(shù)

（2）組織、細菌或培養(yǎng)細胞 SOD 活力計算：

a.按樣本蛋白濃度計算

SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷(V 樣×Cpr)×樣本稀釋倍數(shù)=11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷Cpr×樣本稀釋倍數(shù)

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度建議選用本公司的 BCA 法蛋白含量測定試劑盒（貨號：QYS-237014）。

b.按樣本鮮重計算

SOD 活性(U/g 鮮重)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)×樣本稀釋倍數(shù)=11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷W×樣本稀釋倍數(shù)

c.按細菌或細胞個數(shù)計算

SOD 活力(U/10⁴ cell)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率) ×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)×樣本稀釋倍數(shù)=0.0228×抑制百分率÷(1－抑制百分率)×樣本稀釋倍數(shù) 

V 反總：反應體系總體積，1.026mL；V 樣：加入反應體系中樣本體積，0.09mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL ；W：樣本質(zhì)量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500 萬。

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