總抗氧化能力（Total antioxidant capacity，T-AOC）試劑盒說明書

For Research Use only

僅供研究用

貨號：QYS-23057

分光光度法 50管/48樣

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

總抗氧化能力(T-AOC)測定意義

測定對象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

總抗氧化能力(T-AOC)測定原理

在酸性環(huán)境下，物質(zhì)還原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產(chǎn)生藍(lán)色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映了其總抗氧化能力。

總抗氧化能力(T-AOC)試劑盒自備實驗用品

可見分光光度計、恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液：液體 60mL×1 瓶，使用前預(yù)冷。

試劑一：液體 50mL×1 瓶，避光保存。

試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體 5mL×1 瓶，避光保存。

總抗氧化能力(T-AOC)測定樣品的制備

(1)血清、血漿、唾液或尿液樣品

血漿（制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA  抗凝）4℃，5000rpm  離心10min，取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超過30 d）后再測定。

(2)組織樣品

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

(3)細(xì)胞樣品

按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

總抗氧化能力(T-AOC)試劑盒操作步驟

詳見說明書

充分混勻，反應(yīng) 10min，雙蒸水調(diào)零，1mL 玻璃比色皿，測定 593nm 處吸光值，△A= A 測定-A 空白

注意：空白管只需測定一次。

總抗氧化能力計算

1.定義：樣品的抗氧化能力以達(dá)到同樣吸光度變化值（△A）所需的標(biāo)準(zhǔn)液離子濃度表示。

標(biāo)準(zhǔn)曲線為 y=0.6308 x +0.0645，R2=0.9989

2.計算公式：

(1)按蛋白濃度計算

詳見說明書

(2)按樣品質(zhì)量計算

詳見說明書

(3)按細(xì)胞數(shù)量計算

詳見說明書

（4）按液體體積計算

詳見說明書

V 樣總：加入提取液體積，1 mL； V 反總：反應(yīng)總體積，1.02mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.03mL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL

注意事項

1.試劑二對人體有刺激性，請采取適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴乳膠手套操作。

2.盡量避免使用在酸性條件下呈藍(lán)色或接近藍(lán)色的試劑，否則對本試劑盒的檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾。

3.樣品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢劑和DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反應(yīng)的還原劑。

4.如果樣品測定出來的吸光值在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍以外，需把樣品適當(dāng)稀釋或濃縮后再進(jìn)行測定。

5.試劑盒 2-8℃保存。

注：電子版說明書僅供參考、具體請參考試劑盒紙質(zhì)版說明書

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