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花青素還原酶（anthocyanidin reductase，ANR）

試劑盒說明書

For Research Use only

僅供研究用

貨號：QYS-23090

微量法 100管/48樣

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定

花青素還原酶(ANR)酶活測定意義

花青素還原酶是黃酮合成途徑中的關(guān)鍵酶，在植物體內(nèi)起非常重要的調(diào)控作用，對花青素還原酶的調(diào)控機制研究有利于從基因水平改變植物的品質(zhì)。

花青素還原酶(ANR)酶活測定原理

花青素還原酶在 NADPH 存在的條件下作用于飛燕草色素轉(zhuǎn)變?yōu)楸頉]食子兒茶素和NADP，使反應(yīng)體系在 340nm 處的吸光值下降，吸光值下降速率反應(yīng)了

花青素還原酶的活性。

花青素還原酶(ANR)酶活試劑盒需自備的儀器和用品

天平、研缽、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水。

花青素還原酶(ANR)酶活試劑組成和配制

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加 1mL 蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃ 保存，禁止反復凍融。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加 1mL 蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃ 保存，禁止反復凍融。

試劑四：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加 1mL 蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃ 保存，禁止反復凍融。

酶液提取

1.組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心 

10min，取上清，置冰上待測。

2.培養(yǎng)液等液體：直接檢測。

測定操作表

詳見說明書

花青素還原酶(ANR)酶活性計算公式

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1）按照蛋白濃度計算

酶活性定義：在 40℃，pH6.5 條件下，每毫克蛋白每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T= 80.39×ΔA÷Cpr

此法蛋白質(zhì)含量需另外測定，我司提供三種方法蛋白質(zhì)濃度試劑盒(QYS-237009)雙縮脲法、(QYS-237011)考馬斯亮藍法、(QYS-237013)BCA法。

（2）按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義：在 40℃，pH6.5 條件下，每克組織每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/g 鮮重）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T= 80.39×ΔA÷W

（3）按液體體積計算

酶活性定義：在 40℃，pH6.5 條件下，每毫升液體每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/mL）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T= 80.39×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：

加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，20min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

（1）按照蛋白濃度計算

酶活性定義：在 40℃，pH6.5 條件下，每毫克蛋白每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T= 160.78×ΔA÷Cpr

此法蛋白質(zhì)含量需另外測定，我司提供三種方法蛋白質(zhì)濃度試劑盒(QYS-237009)雙縮脲法、(QYS-237011)考馬斯亮藍法、(QYS-237013)BCA法。

（2）按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義：在 40℃，pH6.5 條件下，每克組織每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/g 鮮重）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T= 160.78×ΔA÷W

（3）按液體體積計算

酶活性定義：在 40℃，pH6.5 條件下，每毫升液體每分鐘催化 1nmolNADPH 定義為一個酶活力單位。

ANR 活性（nmol/min/mL）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T= 160.78×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：

加入提取液體積，1mL；T： 反應(yīng)時間，20min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

注：電子版說明書僅供參考、具體請參考試劑盒紙質(zhì)版說明書。

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