赭曲霉毒素A親和色譜柱關(guān)于 赭曲霉毒素A親和色譜柱 的詳細(xì)介紹
用途
此免疫親和柱可選擇性吸附樣品液中的赭曲霉毒素A，從而對赭曲霉毒素A樣品起到特異性純化和富集的作用。樣品過柱后的洗脫液既可結(jié)合ELISA測試盒或膠體金試紙條進(jìn)行檢測，也可聯(lián)合液相色譜進(jìn)行精確定量。親和色譜柱的使用可以改善信噪比，可提高檢測方法的準(zhǔn)確度。
赭曲霉毒素 A
赭曲霉毒素 A( Ochratox in A, OTA) 是由曲霉屬和青霉屬的某些菌種產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物, 是一種具有強(qiáng)腎臟毒和肝臟毒的真菌毒素，并有致畸、致突變和致癌作用。OTA廣泛存在于各種食物中，可污染糧食谷物、蔬果、調(diào)味料、咖啡、啤酒、葡萄酒及干果等多種農(nóng)作物和食品，嚴(yán)重危害人體健康。
富集原理
親和柱富集的原理是抗原抗體反應(yīng)。樣品經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后緩慢的通過赭曲霉毒素A免疫親和柱，樣品中的赭曲霉毒素A與偶聯(lián)在瓊脂糖珠上的抗體結(jié)合，洗滌掉雜質(zhì)后，根據(jù)檢測需要選用洗脫液洗脫，收集的洗脫液可以用于儀器分析，或是免疫學(xué)檢測方法檢測。
產(chǎn)品包裝組成
1 赭曲霉毒素A免疫親和色譜柱 10支
2 10ml注射器 1支
3 說明書 1份
5 洗脫液A(供儀器分析用） 10 mL
6 洗脫液B（供ELSIA/膠體金檢測用） 10 mL
7 10×PBS 50 mL
8 10×PBST 5 ml
9 飽和Tris-base溶液 5 mL
赭曲霉毒素A親和色譜柱注意事項(xiàng)
1 親和柱在不使用時(shí)，需放置在于2～8℃保存，并確保在有效期之前使用。
2 柱子的填料應(yīng)保持濕潤，在保存、清洗、上樣、洗脫的過程中不能出現(xiàn)填料干燥的情況。
3在操作中，每次需使親和柱內(nèi)上一步的液體全部滴凈方能進(jìn)入下一步操作，填料里不應(yīng)有氣泡
4 標(biāo)準(zhǔn)品或樣品中都可能含有毒素污染，在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)當(dāng)自始至終穿戴橡膠手套、實(shí)驗(yàn)服。
5 實(shí)驗(yàn)完后需對所用材料、容器、設(shè)備做適當(dāng)處理。
樣品處理
稱取試樣50g（精確到1mg）于均質(zhì)器的攪拌杯中，加入5.0g氯化鈉和100.0ml的提取液（乙腈：水=60:40）。將攪拌杯裝于均質(zhì)器上，于22000r/min高速攪拌提取3min。提取液經(jīng)槽紋折疊濾紙過濾于干凈的燒杯中。準(zhǔn)確移取10.0ml濾液于50ml容量瓶中，加磷酸緩沖液稀釋至刻度，混合均勻，經(jīng)玻璃纖維濾紙過濾，收集濾液，用飽和tris-bsae調(diào)節(jié)PH=7.0±0.5，待凈化。
赭曲霉毒素A親和色譜柱操作程序
1 自冰箱取出免疫親和柱，在室溫（22～25℃）平衡10 min，將上方塞和下方塞子取出。上方接上已經(jīng)去掉活塞的注射器。
2 清洗1：將親和柱固定好，往注射器內(nèi)依次加入1 mL PBST、2 mL PBS、200 μL 洗脫液（A或B）、1 mL PBST、大約5mL PBS；每次加完清洗液后套上注射器活塞以控制流速為1滴/2s，滴凈后再加入下一個清洗液；最后流出的PBS的 PH應(yīng)為7±0.5，若尚未達(dá)此PH值，適當(dāng)增加PBS量來清洗。
3上樣：準(zhǔn)確量取5.0 mL處理后的樣品液于注射器，控制流速為1滴/3～5 s，棄去流出液。
4 清洗2： 待樣品滴凈后，依次加入2 mL PBST、2 mL PBS清洗。洗法同清洗1。
7 去掉注射器，根據(jù)后續(xù)檢測需要，加入0.2 mL洗脫液A或B，洗脫液自然滴下，用2 mL的離心管接收洗脫液，接洗脫液時(shí)，流出第一滴洗脫液不要。
8 將收集到的洗脫液轉(zhuǎn)入儀器分析或采用ELISA/膠體金檢測。（用作ELISA/膠體金的收集液用飽和Tris-base調(diào)節(jié)PH=7.0±0.5）
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