萊克多巴胺免疫親和色譜柱
關(guān)于 萊克多巴胺免疫親和色譜柱 的詳細介紹
用途
免疫親和色譜柱可選擇性吸附樣品液中的萊克多巴胺，從而對萊克多巴胺樣品起到特異性純化和富集的作用，樣品過柱后的洗脫液可聯(lián)合液相色譜進行精確定量，也可以結(jié)合ELISA測試盒和膠體金試紙條進行檢測。親和色譜柱使用可以改善信噪比，可提高檢測方法的準確度。
萊克多巴胺
萊克多巴胺是一種β-興奮劑，可以提高瘦肉率，減少脂肪沉積和促進動物生長，被養(yǎng)殖戶或養(yǎng)殖企業(yè)作為養(yǎng)殖促進劑非法使用。人食用了飼喂萊克多巴胺作為添加劑的動物所產(chǎn)生的畜產(chǎn)品后，殘留的萊克多巴胺可導(dǎo)致人體肌肉震顫、心悸、神經(jīng)過敏、頭痛、目眩、惡心、嘔吐、發(fā)燒、戰(zhàn)栗等癥狀，對消費者的健康造成極大危害。因此世界許多國家現(xiàn)已明令禁止在飼料中添加萊克多巴胺來增加動物的瘦肉率，畜產(chǎn)品中禁止萊克多巴胺含量超標。
富集原理
親和柱富集的原理是抗原抗體反應(yīng)。樣品經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后緩慢的通過萊克多巴胺免疫親和柱，樣品中的萊克多巴胺與偶聯(lián)在瓊脂糖珠上的抗體結(jié)合，洗滌掉雜質(zhì)后，根據(jù)檢測需要選用洗脫液洗脫，收集的洗脫液可以用于儀器分析，或是免疫學(xué)檢測方法檢測。
萊克多巴胺免疫親和色譜柱產(chǎn)品包裝組成
1 萊克多巴胺免疫親和色譜柱 10支
2 10ml注射器 1支
3 說明書 1份
5 洗脫液A(供儀器分析用） 10 mL
6 洗脫液B（供ELSIA/膠體金檢測用） 10 mL
7 10×PBS 50 mL
8 10×PBST 5 mL
9 飽和Tris-base溶液 5 mL
注意事項
1 親和柱在不使用時，需放置在于2～8℃保存，并確保在有效期之前使用。
2 柱子的填料應(yīng)保持濕潤，在保存、清洗、上樣、洗脫的過程中不能出現(xiàn)填料干燥的情況。
3在操作中，每次需使親和柱內(nèi)上一步的液體全部滴凈方能進入下一步操作，填料里不應(yīng)有氣泡
4 實驗完后需對所用材料、容器、設(shè)備做適當處理。
樣品處理
1 尿液
用干燥、潔凈的離心管或適當容器采集大約10 mL尿液。尿液樣品放置或離心后取10 mL上清上柱；如果不立即檢測，尿樣在2-8℃冷藏可保存24 h，要注意避免因變質(zhì)而造成的失效或污染。出現(xiàn)陽性結(jié)果時應(yīng)按法定程序分瓶封裝樣品用于確證法檢測。
2 血清
用干燥、潔凈的離心管采集大約10 mL血液，靜置2 h以上，以4000轉(zhuǎn)/分鐘以上轉(zhuǎn)速離心10 min，取10 mL上清上柱。
3 組織
取組織（可以為精肉、肝臟、肺臟和腎臟）20克剪碎或勻漿，置于離心管中，在90℃下水浴15 min（肉熟透為準）后取出，靜置冷卻到室溫，并用定性濾紙過濾，用飽和tris-bsae調(diào)節(jié)PH=7.0±0.5，取10 mL上清上柱。
萊克多巴胺免疫親和色譜柱操作程序
1 自冰箱取出免疫親和柱，在室溫（22～25℃）平衡10 min，將上方塞和下方塞子取出。上方接上已經(jīng)去掉活塞的注射器。
2 清洗1：將親和柱固定好，往注射器內(nèi)依次加入1 mL PBST、2 mL PBS、200 μL 洗脫液（A或B）、1 mL PBST、大約5mL PBS；每次加完清洗液后套上注射器活塞以控制流速為1滴/2s，滴凈后再加入下一個清洗液；最后流出的PBS的 PH應(yīng)為7±0.5，若尚未達此PH值，適當增加PBS量來清洗。
3上樣：準確量取10.0 mL處理后的樣品液于注射器，控制流速為1滴/3～5 s，棄去流出液。
4 清洗2： 待樣品滴凈后，依次加入2 mL PBST、2 mL PBS清洗。洗法同清洗1。
7 去掉注射器，根據(jù)后續(xù)檢測需要，加入0.2 mL洗脫液A或B，洗脫液自然滴下，用2 mL的離心管接收洗脫液，接洗脫液時，流出第一滴洗脫液不要。
8 將收集到的洗脫液轉(zhuǎn)入儀器分析或采用ELISA/膠體金檢測。（用作ELISA/膠體金的收集液用飽和Tris-base調(diào)節(jié)PH=7.0±0.5）
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