Théry C作為外泌體之母，一直執(zhí)著于 "exosomes"一詞的正確使用方式。早前她就提出過 (Théry, et al. 2014)，應(yīng)該是 "exosomes“而不是 ”exosome"，因為后者含有另一個與外泌體截然不同的含義：外切酶體復(fù)合物，具有RNase活性。

最近這些關(guān)于癌癥的文章中經(jīng)常使用 “exosomes”一詞?，F(xiàn)在最普及的exosomes提取步驟是傳統(tǒng)的差速超離、220nm過濾或試劑盒，提取產(chǎn)物若沒有進一步證明它的細胞內(nèi)來源， 應(yīng)定義為混合的小EV——Extracellular Vesicles，即胞外囊泡。（編者按：來自多泡內(nèi)體或MVB的才是exosomes，這一點可以通過檢測囊泡是否含內(nèi)體標志蛋白證明，如CD63）。 因此，這些exosomes的功能可能是廣義EV的，也可能是真正的exosome的。于是Théry C在她的綜述中使用廣義的EV指沒有專門鑒定過大小的囊泡，使用小EV指小于200nm的小囊泡。

EV幫助癌細胞長出“腿”？

1. 腫瘤來源的EV對受體細胞有不同的作用。在原發(fā)性腫瘤位點(見上圖左)，EV能穩(wěn)定細胞突起，增強癌細胞運動能力：通過細胞外基質(zhì) (Extracellular matrix,ECM)貨物沉積，能促進高效而定向的持續(xù)遷移(Persistent migration)，例如含有纖連蛋白(Fibronectin)的小EV。

2. 包含金屬蛋白酶(Metalloproteinases)的EV也可以直接參與ECM重構(gòu)(Remodeling)，使特化的細胞突起具有降解能力，也就是侵入性偽足(Invadopodia)。ECM重構(gòu)幫助腫瘤細胞在組織之間遷移。

3. EV還可以促進前腫瘤基質(zhì)細胞的分化或募集[纖維母細胞(Fibroblasts)和骨髓來源細胞(Bonemarrow-derived cells,BMDC)]。反過來，周圍纖維母細胞分泌的EV復(fù)雜的相互作用可以增強腫瘤細胞遷移能力及耐藥性。

4. 此外，小EV還能進入循環(huán)，從原發(fā)腫瘤到達遠端位點(見上圖右)。小EV的貨物能增加血管通透性，EV可以進入遠端組織，誘導(dǎo)ECM重構(gòu)、募集BMDC以及后來的腫瘤細胞，制造轉(zhuǎn)移前微環(huán)境(Pre-metastatic niche)。

體內(nèi)分析EV轉(zhuǎn)移的方法

最近新的分泌細胞遺傳修飾的方法，能將標簽添加到分泌的EV里，這樣我們就可以看到體內(nèi)EV轉(zhuǎn)移到受體細胞的情況。

I. 將熒光蛋白遺傳融合到棕櫚?；?Palmitoylation)序列，標記全細胞膜，通過mRNA的新熒光我們可以跟蹤結(jié)合或內(nèi)化了EV的細胞

II. 膜結(jié)合熒光素酶蛋白可以分析體內(nèi)遠端生物發(fā)光細胞，這樣就能捕獲結(jié)合EV的熒光素酶蛋白或熒光素酶mRNA

III. 想證明EV的mRNA的存在，可以使用CRE重組酶。內(nèi)源的CRE核定位會使分泌的EV沒有蛋白，但是有mRNA。含有CRE mRNA的EV帶著熒光或酶報告基因到達細胞，只會在DNA重組后表達，那么STOP信號的缺失可通過熒光或比色變化檢測。

EV幫助小RNA轉(zhuǎn)運？

miRNA分泌進小EV，運輸進靶細胞并發(fā)揮功能，直接調(diào)控mRNA靶標，是目前EV領(lǐng)域，特別是癌癥EV，最受關(guān)注的課題之一。這個想法最早是在EB病毒感染的細胞上證明的(Pegtel et al, 2010)，它分泌的小EV轉(zhuǎn)運病毒miRNA到鄰近未感染的細胞，抑制病毒的靶基因。按著這個思路，數(shù)個課題組也在近期報道在腫瘤微環(huán)境中EV參與已知的miRNA分泌，并與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)。

實際上，除了EV包裹的miRNA，miRNA起的作用也有可能是其他EV組分在靶細胞表達內(nèi)源miRNA引起的。想排除這個機制也很簡單，只要受體細胞是無法表達此miRNA的就可以，例如轉(zhuǎn)運的miRNA是外源基因組編碼的，如病毒的 (Pegtel et al, 2010) 或寄生蟲的 (Buck et al, 2014)，又或者受體細胞是小鼠的，并沒有所研究的miRNA (Alexander et al, 2015)。但是在癌癥研究方面目前還沒考慮到這個問題，exosome研究領(lǐng)域需要一套更明確的control，所以Théry C認為癌癥的EV參與miRNA轉(zhuǎn)運是一個令人振奮的課題，各位研究者可嘗試給出更嚴謹?shù)慕Y(jié)果。Théry C還提到，父母可以通過EV轉(zhuǎn)運信息影響后代也是一個非常有潛力而有趣的課題。

EV與免疫

最 近報道發(fā)現(xiàn)腫瘤微環(huán)境中EV的RNA有著一段特殊的序列(Boelenset al, 2014)：它帶有5'-triphosphate末端，通過RIG-I感應(yīng)器被受體細胞基質(zhì)識別，誘導(dǎo)干擾素應(yīng)答，跟病毒感染類似。這種應(yīng)答也參與癌癥 細胞對放療或化療的應(yīng)答。此發(fā)現(xiàn)是小EV與包膜病毒相似的又一證據(jù)，同時也帶來了新的問題：是何種表面分子協(xié)助受體細胞膜融合RNA或小分子內(nèi)含物到細胞 質(zhì)呢？抑或是其他機制促使的，如EV膜和受體細胞的膜之間形成通道？這個問題有待探索。

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